Durchflusszytometrie
Die zentrale Ressource für Durchflusszytometrie bietet Mitgliedern des UNMCCC, Laboren der UNM und der gesamten wissenschaftlichen Gemeinschaft Zugang zu fortschrittlichen Zytometrie-Technologien und kompetenter technischer Unterstützung. Die Ressource ermöglicht modernste durchflusszytometrische Analysen und Hochgeschwindigkeits-Zellsortierung durch ein breites Spektrum skalierbarer Servicemodelle, darunter Komplettservice, begleitete Arbeitsabläufe und die eigenständige Nutzung – alles individuell zugeschnitten auf die unterschiedlichen Bedürfnisse und Erfahrungsstufen der Nutzer.
Die Services unterstützen ein breites Anwendungsspektrum, darunter klassische Immunphänotypisierung, Zellzyklus- und Apoptoseanalyse, Tumormikroumgebungs- und Leukozyteninfiltrationsstudien sowie Einzelzellsortierung zur Generierung monoklonaler Zelllinien, Aufbau von CRISPR-Bibliotheken oder Integration in Sort-to-Sequencing-Workflows (z. B. 10x Genomics scRNA-seq). Auch Bulk-Sortierung ist für Rekultivierung, Transplantation oder nachgelagerte Omics-Analysen verfügbar.
Fachkundiges Personal berät Sie bei der Panelgestaltung, Protokollentwicklung, Geräteeinrichtung und Dateninterpretation, um qualitativ hochwertige und reproduzierbare Ergebnisse zu gewährleisten.
W. Curt Hines, PhD
Fakultätsdirektor, gemeinsame Ressource für Durchflusszytometrie
Außerordentlicher Professor, Abteilung für Biochemie und Molekularbiologie
Fitzsaal Zimmer 255
915 Camino de Salud NO
Albuquerque, NM 87131
Telefon: 505-681-0014
Josh Monts, MS
Technischer Direktor, gemeinsame Ressource für Durchflusszytometrie
2325 Camino de Salud, CRF 217
UNM Comprehensive Cancer Center
Zentrum für Gesundheitswissenschaften der Universität von New Mexico
Albuquerque, NM 87131
Telefon: 505-925-0064
Gemeinsame Ressource: Durchflusszytometrie
Modernste Durchflusszytometrie und Hochgeschwindigkeits-Zellsortierung durch ein Repertoire skalierbarer Servicemodelle.
Zytometrie-Instrumentierung: Analysatoren
Erfahren Sie hier mehr über Attune NxT- Laser 405 (6), 488 (2), 561 (3), 640 (3) Nanometer
- 14 Farbdetektoren
- Schalttafelbauer
UNM-Gebühr ohne Unterstützung: 94 USD/Std.
Nicht-UNM-Gebühr: 141.94 USD/Std.
Erfahren Sie hier mehr über BD Accuri C6- Laser 488 (3), 640 (1) nm
- 4 Farbdetektoren
- Schalttafelbauer
UNM-Gebühr ohne Unterstützung: 73 USD/Std.
Nicht-UNM-Gebühr: 110.23 USD/Std.
Erfahren Sie hier mehr über Cytek Aurora- Laser 405nm, 488nm, 561nm 641nm
- Drei Streukanäle
- 48 Fluoreszenzkanäle
- Schalttafelbauer
UNM-Gebühr ohne Unterstützung: 113 USD/Std.
Nicht-UNM-Gebühr: 170.63 USD/Std.
Erfahren Sie hier mehr über CytoFLEX S- Laser 405 (2), 488 (2), 561 (3), 640 (2) Nanometer
- 9 Farbdetektoren
- Schalttafelbauer
UNM-Gebühr ohne Unterstützung: 79 USD/Std.
Nicht-UNM-Gebühr: 119.29 USD/Std.
Zytometrie-Instrumentierung: Zellsortierer
Erfahren Sie hier mehr über CytoFLEX SRT- Laser 405 (5), 488 (2), 561 (5), 640 (3) nm
- 15 Farbdetektoren
- Schalttafelbauer
UNM-unterstützte Gebühr
Instrumentengebühr: 156 $/Std. + Technikgebühr: 128 $/Std.
Nicht-UNM-Gebühr
Instrumentengebühr: 235.56 $/Std. + Technikgebühr: 181.20 $/Std.
Erfahren Sie hier mehr über Velocyt- Farbdetektoren
- Anwendungstechnische Hinweise
UNM-Gebühr für Studierende ohne Betreuung: 73 $/ Std.
Gebühr für Nicht-UNM-Studierende: 110.23 $/ Stunde
Anwendungen, Fähigkeiten und Anerkennung
Gemeinsame Ressource für UNM-Durchflusszytometrie
MSC 08-4640 UNM CRF 217A
915 Camino de Salud
Albuquerque, NM 87131
Telefon 505 925 0064
Die Durchflusszytometrie kann für folgende Anwendungen und Verfahren verwendet werden:
- Immunphänotypisierung
- Zellzyklus- und Tumorploidieanalyse
- Zellproliferationsassays
- Enzymatische Aktivität
- Charakterisierung und Quantifizierung von Zytokinen
- Charakterisierung von Apoptose und Nekrose sowie Zelllebensfähigkeit
- Zellstoffwechsel
- Intrazellulärer Calciumfluss
- Redoxreaktionen
- Mitochondriengehalt und Membranpotential
- Transfektionseffizienz
FlowJo-Lizenzen sind verfügbar, bitte erkundigen Sie sich nach den Kosten.
Benutzer mit aktiven Portallizenzen sollten diesen Leitfaden konsultieren.
Die gemeinsam genutzte Ressource für Durchflusszytometrie verfügt über die folgenden Funktionen zur Zellsortierung:
- Massenzellsortierung – maximal 4 verschiedene Populationen gleichzeitig
- Einzelzellsortierung in Multi-Well-Platten
- Erfordert einen unterstützten Betrieb
Zu den Sortieranwendungen gehören die Generierung monoklonaler Zelllinien und CRISPR-Bibliotheken, einschließlich der Anreicherung nach der Transfektion, sowie die Reinigung einer heterogenen Probe, um gereinigte Zell- oder Populationsuntergruppen erneut zu kultivieren, zu transplantieren oder zu sequenzieren.
Es ist die Richtlinie der Ressource, dass alle neuen Benutzer maschinenspezifische Schulungen absolvieren. Diese Schulungen bestehen normalerweise aus zwei verschiedenen Sitzungen mit dem Flow Core Manager und einem einzelnen Benutzer. Jede Sitzung sollte zwischen 1 und 2 Stunden dauern.
Die Schulungen werden über iLabs geplant . Weitere Informationen zu iLabs finden Sie auf dieser Seite.
Der Benutzer ist dafür verantwortlich, Folgendes für seine Schulungssitzung bereitzustellen.
Aufbereitete Zellen (1x10⁶ / ml) in FACS/Eppendorf-Gefäßen – Für die Cytek Aurora-Schulung werden FACS-Gefäße benötigt.
- Ihre Zellen sollten durch einen 50-μm-Filter gefiltert werden, bevor sie auf den Zytometern laufen
- Das Zellvolumen sollte zwischen 500 und 1000 μL liegen
Die folgenden Zellen werden für das Training benötigt
- Unbefleckte Kontrolle
- Kompensationskontrollen – als Einzelfarbkontrollen für jedes Fluorochrom. Kompensationsperlen werden für schwache/seltene Marker bevorzugt. Zellen werden für stark exprimierte Marker bevorzugt.
- Vollständig gefärbte Proben
Gebühren für die Instrumentenausbildung:
- UNM-Gebühr ohne Unterstützung: 192 USD/Std.
- Nicht-UNM-Gebühr: 285.39 USD/Std.
Um die Nutzung dieser freigegebenen Ressource zu bestätigen, fügen Sie bitte Folgendes in Ihre Veröffentlichungen ein:
Diese Forschung wurde teilweise durch den UNM Comprehensive Cancer Center Support Grant NCI P30CA118100 und die gemeinsame Ressource Durchflusszytometrie unterstützt.
Agilent iLab-Service
Die UNMCCC Shared Resources nutzen Agilent iLab für die Rechnungsstellung, Abrechnung und Reservierung von Geräten.
Bestehende Nutzer können sich unter unm.ilab.agilent.com bei iLab anmelden . Bei Problemen mit der Einrichtung Ihres iLab-Kontos oder dem Zugriff wenden Sie sich bitte an Palakshi Reddy Bandapalli oder rufen Sie die Nummer 505-272-4539 an.
Bei Fragen zu spezifischen Dienstleistungen oder Geräteschulungen wenden Sie sich bitte an den technischen Leiter der jeweiligen Shared Resource.
Andere Kernausrüstung
Erfahren Sie hier mehr über Biotek Neo2- Hybrider Multimode-Plattenleser
- Unabhängige Filter- und Monochromator-basierte Optik
- Absorption, Fluoreszenz, Lumineszenz, Fluoreszenz Polarisationsmessungen Polar
UNM-Gebühr ohne Unterstützung: 89 USD/Std.
Nicht-UNM-Gebühr: 134.39 USD/Std.
Erfahren Sie hier mehr über MAGPIX- Magnetisches Bead-basiertes Multianalyt-Panel zur Quantifizierung von Biomarkern
UNM-Gebühr ohne Unterstützung: 97 USD/Std.
Nicht-UNM-Gebühr: 146.47 USD/Std.
Richtlinien und Verfahren
Es liegt in Ihrer Verantwortung, diese Informationen zu lesen und zu verstehen.
Die UNM Flow Cytometry Shared Resource bietet analytische Durchflusszytometrie und Zellsortierungsdienste in CRF 217. Um einen reibungslosen Betrieb und fairen Zugang zu den Geräten für alle Untersucher zu ermöglichen und die Geräte in ordnungsgemäßem Zustand zu halten, müssen Betriebsrichtlinien und -verfahren befolgt werden.
Nachfolgend werden die wichtigsten Betriebsrichtlinien beschrieben.
Termine für alle Gerätenutzungszeiten müssen in iLabs geplant werden.
Für die Zellsortierung ist die Unterstützung des Bedieners erforderlich.
Zellsortierungstermine müssen mindestens 24 Stunden im Voraus angekündigt werden. Die Abrechnung nach Zellensortierung beginnt, wenn Ihr Termin beginnt. Die Abrechnung endet, wenn die Sortierung beendet ist. Wenn Ihre Sortierung vorzeitig endet, wird Ihnen diese Zeit nicht in Rechnung gestellt.
Zugelassene, geschulte Anwender können noch am selben Tag Termine zur Selbstbedienung vereinbaren.
Abend- und Wochenendtermine sind nur für den geschulten, selbst bedienten Gebrauch gestattet.
Obwohl Kalibrierungen und andere Wartungsverfahren in der Verantwortung des Flow Core liegen, ist es wichtig, dass die Benutzer die in den Schulungssitzungen beschriebenen Verfahren zum Starten, Herunterfahren und Reinigen ordnungsgemäß durchführen.
Nach jeder Verwendung des Zytometers muss eine ordnungsgemäße Dekontamination und Reinigung der Fluidikschläuche und der Durchflusszelle erfolgen.
Wasch- und Reinigungsvorgänge nach der Akquisition gelten als normale Laufzeit und werden als Teil der gesamten Terminzeit in Rechnung gestellt.
Alle Benutzer müssen sowohl im BSL1- als auch im BSL2-Laborsicherheitstraining auf dem neuesten Stand sein (im Research Safety Training enthalten, das für alle Forscher auf dem Campus obligatorisch ist).
BSL3- und radioaktive Proben sind in unserer Einrichtung unter keinen Umständen erlaubt.
Neue Benutzer der Durchflusszytometrie müssen vor dem Zugriff auf die Instrumente vom Kernpersonal geschult werden.
Von Selbstfahrern wird erwartet, dass sie ohne die Hilfe des Anlagenbetreibers in der Lage sind, den normalen Betrieb einschließlich An- und Abfahren, Analyse, Sterilisation und Wartung (Düsenverstopfung usw.) durchzuführen.
Bitte beachten Sie: Wenn für einen selbst durchgeführten Lauf ohne Unterstützung mehr als 20 Minuten Unterstützung durch das Personal erforderlich sind, wird ein „Technikerzeit“-Tarif hinzugefügt, um die Buchung in eine teilweise oder vollständig unterstützte Sitzung umzuwandeln: Nutzung ohne Unterstützung + Technikerzeit/Stunde.
Wenn Ihr Lauf länger dauert als erwartet und in die Zeit eines anderen Benutzers gerät, hat dieser das Recht, Sie zum Zeitpunkt seines Laufs zu stoßen.
Letzter Benutzer des Tages – Es liegt in der Verantwortung des letzten Benutzers des Tages, das Analysegerät auszuschalten. Wenn die letzte Person des Tages ihre geplante Zeit nicht einhalten kann, muss sie die Person vorher informieren, um die Maschine auszuschalten. Wenn keine andere Person anwesend ist, muss die letzte Personenreservierung zum Durchflusskern kommen und die Maschine ausschalten.
Reservierungen können am Nutzungstag vorgenommen werden – und sollten in iLabs erfolgen. Das Ausfüllen der genauen Nutzungszeit in den Notebooks jedes Instruments stellt sicher, dass Ihre Nutzungszeit an der Maschine verrechnet wird
Einzelbenutzerschulungen sind nur nach Vereinbarung möglich und werden anhand von Proben durchgeführt, die vom Prüfarzt bereitgestellt werden.
Das Flow-Kernpersonal bestimmt, wann der Ermittler in der Lage ist, selbst zu arbeiten.
Die Benutzer der Einrichtung sind für die gesamte Datenarchivierung verantwortlich.
Die Shared Resource Facility hat nicht die Kapazität, als Datenspeicher zu dienen
Benutzer sollten Probleme in der Einrichtung unverzüglich Josh Monts unter jmonts@salud.unm.edu melden.
Wir benachrichtigen Benutzer, wenn ein Instrument ausgefallen ist. Wenn das Instrument, auf dem Sie Ihre Reservierung vorgenommen haben, nicht funktioniert, werden wir unser Bestes tun, um Sie bei der Erfassung Ihrer Daten auf einem anderen Instrument zu unterstützen und verzichten auf den Betreuungszuschlag.
Direktor Dr. Curt Hines ist der letzte Schiedsrichter für Probleme, die in der Einrichtung auftreten.